第三代PCR技术——数字PCR技术简介
? ? ? ?数字PCR技术是继一≡代普通PCR、二代荧光定量PCR之后㊣的第三代PCR技术。该技术将一个样本分成几到几十万份,分配到№不同的反应单元,每个单元包含一个或多个拷贝╳的目标分子( DNA 模板) ,在每个反应单元中分别对目标分子进行PCR扩增;扩增结束后,将有荧光信号的♂微滴判读为1,没有荧光信号的微滴判读为0,最终根据泊松分布原理以及阳性微滴的比例,计算出◣待检靶分子的浓度或拷贝数。
? ? ? ?数字PCR 是一种全新的绝对定量方式,与∑传统定量 PCR 相比具有以下优点:
? ? ? ?绝对定量:不再依赖△于 Ct 值和标准曲线,直接给出靶序●列的起始浓度,实现真正意@义上的绝对定量。
? ? ? ?更高灵敏〒度与特异性:数字PCR可实ξ 现万分之一稀有样本的绝对定量,可用于极微量核酸样本检测、复杂背景下的稀有突变检测、表达量微小差异鉴定、单细胞基因表达等方面。
? ? ? ?数字PCR在分子诊断领域将会发挥巨大的作用,数字 PCR 适用于肿》瘤生物标志物研究、拷贝数变异分析、微生物检测、转基因生物检测、mRNA和miRNA检测、基因相对表达研究ξ等,并对遗传病、癌症、产前诊断的研究提供了一种全新的技术思路与手段,具有广泛的、不可替代的应用前景。
锐讯DropX-2000平台特点
四通道检测:FAM/HEX VIC/CY5//ROX 四色荧光检测,提升数字PCR系统对多重PCR的包容性;
一体化芯片设计:可快▅速生成20,000~30,000个均匀微滴,液滴均一稳定、尺寸均一;全封闭体①系,避免交叉污染。
数据质控及回溯:支持图像回溯及样本一周内复测。
兼 容 染 料 法 和 探 针 法 及 其 他 类 似 原 理 荧 光 方 法
锐讯数字PCR服务项目:
服务编号 | 服务内容 | 实验耗时 |
03.04.0002 | 样本DNA抽提及模板制备 | 1-2个工作日 |
03.04.0003 | 样本RNA抽提及模板制备 | 1-2个工作日 |
03.04.0004 | RNA样本反转录 | 1-2个工作日 |
03.04.0005 | 引物探针设计 | 5-7个工作日 |
03.04.0006 | 引物探针合成 | 5-7个工作日 |
03.04.0007 | 数字PCR检测 | 1-3个工作日 |
DNA样品:纯度OD260/280比值为1.6-1.8,浓度≥10 ng/μl,体积≥10μl。需要冰袋运输。
RNA样品:纯度OD260/280比值为1.8-2.0,浓度≥20 ng/μl,体积≥20μl。需要干↓冰运输。
暂不接受样本:
全血、尿液、粪便等。
交付报告:
实验报告:包括实①验方法、步骤、所用试剂、仪器型号及相关分析数据等。